MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針

產品標簽

MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針；MitoTracker Green FM 綠色線粒體熒光探針；Lysotracker Green 綠色溶酶體熒光探針；羅丹明123；JC-1 線粒體凋亡檢測；CAS: 201860-17-5；

產品信息

產品描述

MitoTracke Orange CMTMRos是一種橙色熒光染料，用于對活細胞線粒體進行染色，該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后，該染料可穩定保存。

產品特性

保存與運輸方法

保存：≤-20°C避光干燥保存，收到貨至少12個月有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品量非常少，使用前低速離心后直接加適當溶劑溶解使用，切勿分裝稱量。

2） 整個染色過程中需注意避光。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 儲存液的配制

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。之后加入116.9946µL高質量無水的DMSO溶解MitoTracke Orange CMTMRos（Mw=427.37 g/mol），使其濃度為1mM。儲存液最好能現用，若用不完，請根據單次用量分裝，≤-20℃避光干燥保存。

2. 工作液的配制

根據不同的實驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據細胞類型和其他的相關因素如細胞或組織的透化等進行適當調整。

利用培養基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度，工作液需現配現用。常用的工作濃度范圍是25-500nM，但對于后續需要進行固定和透化的細胞染色，建議使用工作濃度范圍在100-500nM。為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

3.   染色步驟（貼壁細胞）

1）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長。

2）待細胞生長到合適密度，吸除培養液，加入適量37℃預熱的含探針培養基。于特定的生長狀態下孵育15～45min（具體孵育時間需根據細胞類型而定）。

3）利用新鮮培養基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）或熒光酶標儀下觀察。若細胞需固定和透化，參考染色后的固定和透化流程。

4.  染色步驟（懸浮細胞）

1）離心沉淀細胞，吸除上清。

2）利用37℃預熱的含探針培養基重懸細胞，于特定的生長狀態下孵育15～45min（具體時間需根據細胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養基重懸細胞。

4）用含合適濾片的流式細胞儀、基于酶標板的分析儀或熒光顯微鏡觀察。如果需要將細胞固定在蓋玻片上，于固片前用poly-D-lysine包被載玻片或者蓋玻片。若細胞后續需要固定或透化，參考染色后的固定和透化流程。

5. 染色后的固定和透化流程

1） 染色后，用新鮮預熱的緩沖液或生長培養基清洗細胞；

2） 小心吸掉覆蓋細胞的緩沖液或培養基，用含2-4%多聚甲醛的新鮮配制預熱的緩沖液或培養基來固定。研究顯示內皮細胞用3.7%多聚甲*-醛溶液于37℃固定約15min效果很好。

3） 固定之后，用緩沖液清洗細胞幾次；

4） 【可選】若后續步驟如ICC需要透化，則用含表面活性劑如Triton X-100的緩沖液來透化細胞。一旦透化結束，用緩沖液清洗細胞并進行后續ICC流程。研究顯示，用含0.2% Triton X-100的PBS緩沖液透化內皮細胞10min效果很好。

做為備選方案，細胞也可以用冰丙酮透化處理5min，之后用PBS清洗。即使后續細胞不用進行其它抗體標記，這一丙酮透化步驟也可能改善信噪比。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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